細胞名稱：C2C12小鼠成肌細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。（注意密封培養瓶放入培養箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養基，另外一瓶用自己配的培養基，以便進行對比培養）

培養步驟

細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養液收集至離心管中，留5ml培養基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養，傳代具體步驟如下細胞傳代：

A1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，將T25 培養瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min；

2、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上。

B1、對于貼壁細胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基重懸。

4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的培養基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的細胞培養箱中培養。

B2、貼壁細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

細胞復蘇：

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO₂細胞培養箱中培養；

4、第二天，換用新鮮培養基繼續培養。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發生容易細胞脫落，這是正?，F象。請將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養（后期對比培養），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養箱中培養。

售后服務告知書

1）細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。

二）細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；

4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；

5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；

7. 視具體情況而定。

YS053CBT549人乳腺導管癌細胞

YS054CBV2小鼠小膠質細胞

YS055CBxPC-3人原位胰腺腺癌細胞

YS056CC127小鼠乳腺腫瘤細胞

YS057CC2C12小鼠成肌細胞

YS058CC6大鼠神經膠質瘤細胞

YS059CC6/36白紋伊蚊細胞

YS060C株C666-1鼻咽癌細胞

YS062CC918人眼脈絡黑色素瘤細胞

YS063CCaco-2人結腸癌細胞

YS064CCaEs-17人食管癌細胞

YS065CCaki-1癌皮膚轉移細胞人腎透明細胞

YS066C（胸膜滲出液）Calu-3人肺腺癌細胞

YS067CCAM191EBV-轉化人淋巴細胞

YS068CCapan-1胰腺癌細胞

YS069CCapan-2胰腺癌細胞

YS070Ccaski人子宮腺癌細胞

YS071CCatL1家貓肺成纖維樣細胞

YS072CCatL2家貓肺成纖維樣細胞

YS073CCatS2家貓皮膚成纖維樣細胞

YS074CCBRH-7919大鼠肝癌細胞

YS075CCCRF-CEM白血病T淋巴細胞人急性淋巴細胞

YS076CCFPAC-1人胰腺癌細胞

YS077CCHL中國倉鼠肺細胞

YS078CCHL-Don中國倉鼠肺成纖維樣細胞

YS079CCHO中國倉鼠卵巢細胞

YS080C二氫Y酸還原酶缺陷CHO/dhFr-倉鼠卵巢細胞

YS081C亞型CHO-K1中國倉鼠卵巢細胞

YS082CCL187/CCL187人大腸癌細胞

YS083CCNE-1高分化鼻咽癌細胞

YS084CCNE-2低分化鼻咽癌細胞

YS085CCNE-2Z人鼻咽癌母系細胞

YS086CCOC1人卵巢癌細胞

YS087C卵巢癌CoC2細胞

YS088CCOLO320DM人結直腸腺癌細胞

YS089CCOLO205人結腸癌細胞

YS090CCOS-1非洲綠猴SV40轉化的腎細胞

YS091CCOS-7非洲綠猴SV40轉化的腎細胞

YS092CDIFI人結腸癌細胞

YS093CCP-88草魚胚胎細胞

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