核酸(nucleic acid)是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物質(zhì)之一，廣泛存在于所有動植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為脫氧核糖核酸(簡稱DNA)和核糖核酸(簡稱RNA)，核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量為9.2%，RNA中磷含量為9.0%

5′-核苷酸檢測試劑盒(過碘氧化法)檢測原理是在強(qiáng)酸條件下，核酸分子中的有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，后者與鉬酸銨形成黃色的磷鉬酸銨，隨后還原劑把高價鉬離子還原成低價鉬離子，進(jìn)而形成藍(lán)色的鉬藍(lán)，在一定濃度范圍藍(lán)色深淺與磷含量成正比，通過分光光度計在660nm處檢測吸光度，通過檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得磷含量，如果待測樣品中有無機(jī)磷，應(yīng)予以扣除，否則結(jié)果偏高。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項:

1、實(shí)驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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