活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羥基自由基、超氧自由基和過氧化氫。在細胞或組織的正常生理代謝過程中會

產生活性氧，同時一些環境因子例如紫外照射、環境污染等也可以誘導活性氧的產生，活性氧產生后可以導致細胞內脂、

蛋白和DNA等的氧化損傷，誘發氧化應激(Oxidative stress)，繼而導致各種腫瘤、動脈粥樣硬化、風濕性關節炎、糖尿病、

肝損傷、以及中樞神經系統疾病等。機體中存在多種抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除體內產生的

各種活性氧，以阻止活性氧誘導的氧化應激(oxidative stress)的產生；一個體系內的各種抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的總

的水平即體現了該體系內的總抗氧化能力，因此測定血漿、血清、尿液、唾液等各種體液，細胞或組織等裂解液中的總抗氧化

能力具有非常重要的生物學意義。

總抗氧化能力(FRAP微板法)即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with ABTS method，

簡稱T-AOC Assay Kit，是一種采用ABTS作為顯色劑，可以對血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、

植物或中草藥抽提液、或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力進行檢測的試劑盒；ABTS法測定T-AOC的檢測原理是

在氧化劑作用下ABTS被氧化成綠色的ABTS?+，在抗氧化物存在時ABTS?+的產生被抑制，可在734nm或405nm測定ABTS?+的

吸光度即可測定并計算出樣品的總抗氧化能力。Trolox是一種維生素E的類似物，具有和維生素E相似的抗氧化能力，

可作為其它抗氧化物總抗氧化能力的參考，例如Trolox的總抗氧化能力為1，相同濃度情況下，其它物質的抗氧化能力可用其抗氧

化能力和Trolox相比的倍數來表示，該試劑盒快捷方便，加入待測樣品3~6分鐘即可進行吸光度測定，

通常10~20個樣品可以在20分鐘內檢測完畢。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機、恒溫箱或水浴鍋、酶標儀、酶標板

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測。

③細胞或組織樣品∶取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當的稀釋。

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設置對照孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并

注意避免產生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調零)，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(備選方案)，以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應為非必須步驟，可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應盡快檢測，亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區的酶標儀和酶標板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿，但應注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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