TdT末端轉移酶(Terminal Transferase)試劑是一種不依賴于模板的DNA聚合酶，催化脫氧核苷酸結合到DNA分子的3’羥基端。帶有突出、

凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子 均可作為TdT的底物，加尾長度可達5~300nt。本酶經電子重構架技術篩選，

使其可以在45°C高溫下反應，從而避免因DNA二級結構造成的加尾效 率下降。優化的活性中心結構，使其對模板底物結合能力

更強，底物加尾比例更高。該末端轉移酶（TdT）廣泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修飾堿基（如 ddNTP，DIGdUTP）

標記DNA 3’末端、TdT介導的dUTP 缺口末端標記技術（細胞凋亡的原位檢測）等試驗。

組分

組分名稱數量

Terminal Transferase (20 U/μl)50 μl

10×TdT Buffer1 ml

應用

寡核苷酸或DNA?3’羥基末端標記

DNA末端加尾(DNA?tailing)

5’-RACE

合成同一種脫氧核苷酸的寡聚鏈

活性定義

37℃  60分鐘內，催化1nmol?dNTP加入到多聚核苷酸3’羥基末端中所需的酶量定義為1個活性單位

儲存

-20℃可保存3年。

熱失活

75°C 20min。

注意事項

1、適量EDTA可使Terminal Transferase的活性喪失。

2、金屬離子螯合劑，較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對Terminal Transferase活性具有抑制作用。

TdT末端轉移酶(Terminal Transferase)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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