UC57 Simple通用克隆載體采用了TOPO酶連接技術(shù)，載體預(yù)先偶聯(lián)上TOPO酶，當(dāng)加入PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后，5 min就可以完成

連接反應(yīng)，連接陽(yáng)性率高。pUC57 Simple TA/平端通用克隆載體試劑消除了大部分的常用酶切位點(diǎn)，便于后續(xù)亞克隆。

該產(chǎn)品適用于Taq酶擴(kuò)增的含“A"尾巴和高保真酶擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物的連接，載體含有氨芐青霉抗性篩選標(biāo)記。

優(yōu)勢(shì)

快速連接，最快僅需5min；

操作簡(jiǎn)單，僅需加入載體和片段即可；

無(wú)需藍(lán)白斑篩選，陽(yáng)性率高；

不包含任何酶切位點(diǎn)，便于后續(xù)亞克隆。

平末端和A尾產(chǎn)物通用。

注意：引物不能磷酸化。

組分

組分名稱D2401（20T）D2402 (20T)

pUC57 Simple Vector(5 ng/μl)20μl20μl

M13F(-47) (10 μM)100μl100μl

M13R(-47) (10 μM)100μl100μl

RTS DH5α凍干感受態(tài)2瓶無(wú)

Nano E.coli Transfection Reagent1 ml無(wú)

儲(chǔ)存

RTS DH5α凍干感受態(tài)在未溶解狀態(tài)下，可于-20℃長(zhǎng)期保存（>2年），已經(jīng)溶解后，請(qǐng)-60℃以下保存（3個(gè)月）。

pUC57 Simple TA/平端通用克隆載體試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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