本產品僅供科研，不得做其它用途

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本產品就是根據PCR原理專門開發的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

3. 產品精心優化且特異性高，引物是根據高度保守區設計，不會跟除此之外的其它微生物DNA發生交叉反應。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產品足夠50次20μL體系的PCR反應。

6. 本產品只能用于定性實驗，不能用于定量。

7. 本產品只能用于科研

香菇源性成分PCR試劑盒樣品的制備　

1. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取反應，多出的兩個中一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 牛乳頭瘤病毒 PCR 陽性對照（1×10E6 拷貝/μL，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對照。

2. 用自選方法純化上述 N+2 個樣品的 DNA。本試劑盒跟市場上大多數細菌提取試劑盒兼容。

電泳分析　

1. 取 5-10uL 擴增產物進行常規瓊脂糖電泳，檢測擴增效果，由于擴增產物較短，建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

2. 陽性樣品預期得到的擴增產物長度為 200bp 左右。如果兩個陰性對照（樣品制備陰性對照或 PCR 陰性對照）有此擴增產物，說明環境污染，則整個實驗無效，不需要分析實驗結果。

3. 如果所有樣品和 PCR 陽性對照均無此擴增產物，則說明有系統性的問題（試劑、設備、程序、操作等），需要重復并排查原因。

4. 如果沒有上述兩種情況，則實驗有效，可以分析樣品的擴增結果。N+2 個樣品中有擴增產物的判定為陽性，無則判定為陰性。

使用方法：

一、稀釋標準曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。

由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同。

3. 在 6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

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